Exosomes and cystic echinococcosis: systematic review / Exosomas y equinococosis quística: revisión sistemática

SUMMARY: Exosomes are small and single-membrane secreted organelles, up to 200 nm in diameter that have the same topology as the cell, but are enriched in proteins, nucleic acids, lipids, and glycoconjugates. It can be found in any type of body fluids such as plasma, urine, saliva, sperm, bile, etc. On the other hand, cystic Echinococcosis (CE) has been studied from different points of view, among others, from genomics and proteomics, and the presence of CE exosomes in humans and other intermediate hosts has been reported in very few articles. The aim of this review was to report the evidence available regarding exosomes and CE. Systematic review. Data sources: Trip Database, SciELO, WoS, MEDLINE, EMBASE and SCOPUS. Eligibility criteria: Studies related to CEin any type of host and state of the parasite, without language restriction, published between 1966-2021. Variables: Year of publication, geographical origin, species isolated, location of exosomes. Forty-two studies were initially identified. After scrutinizing titles and abstracts, checking duplications and in-depth analysis of the studies selected, 12 articles including human, bovine, sheep, dog samples were also included. All were case reports or case series. The highest proportion of articles was published between 2019 and 2021 (58.3 %). Publications were predominantly from China (58.3 %). Evidence about exosomes and CE is scarce and reduced range of articles and cases.

RESUMEN: Los exosomas son orgánulos pequeños y secretados por una sola membrana, de hasta 200 nm de diámetro que tienen la misma topología que la célula, pero están enriquecidos en proteínas, ácidos nucleicos, lípidos y glicoconjugados. Se puede encontrar en cualquier tipo de fluidos corporales como plasma, orina, saliva, esperma, bilis, etc. Por otro lado, la equinococosis quística (CE) ha sido estudiada desde diferentes puntos de vista, entre otros, desde la genómica y proteómica, y la presencia de exosomas de CE en humanos y otros huéspedes intermediarios se ha informado en muy pocos artículos. El objetivo de esta revisión fue informar la evidencia disponible con respecto a los exosomas y la CE. Revisión sistemática. Fuentes de datos: Trip Database, SciELO, WoS, MEDLINE, EMBASE y SCOPUS. Criterios de elegibilidad: Estudios relacionados con la EC en cualquier tipo de hospedador y estado del parásito, sin restricción de idioma, publicados entre 1966-2021. Variables: año de publicación, origen geográfico, especie aislada, ubicación de exosomas. Se identificaron inicialmente 42 estudios. Después de examinar los títulos y resúmenes, verificar las duplicaciones y analizar en profundidad los estudios seleccionados, se incluyeron 12 artículos que incluían muestras de humanos, bovinos, ovinos y caninos. Todos fueron informes de casos o series de casos. La mayor proporción de artículos se publicó entre 2019 y 2021 (58,3 %). Las publicaciones fueron predominantemente de China (58,3 %). La evidencia sobre exosomas y CE es escasa y la gama de artículos y casos es reducida.

Functional and genomic characterization of three novel cell lines derived from a metastatic gallbladder cancer tumor

BACKGROUND: Gallbladder cancer (GBC) is the most common tumor of the biliary tract. The incidence of GBC shows a large geographic variability, being particularly frequent in Native American populations. In Chile, GBC represents the second cause of cancer-related death among women. We describe here the establishment of three novel cell lines derived from the ascitic fluid of a Chilean GBC patient, who presented 46% European, 36% Mapuche, 12% Aymara and 6% African ancestry. RESULTS: After immunocytochemical staining of the primary cell culture, we isolated and comprehensively characterized three independent clones (PUC-GBC1, PUC-GBC2 and PUC-GBC3) by short tandem repeat DNA profiling and RNA sequencing as well as karyotype, doubling time, chemosensitivity, in vitro migration capability and in vivo tumorigenicity assay. Primary culture cells showed high expression of CK7, CK19, CA 19-9, MUC1 and MUC16, and negative expression of mesothelial markers. The three isolated clones displayed an epithelial phenotype and an abnormal structure and number of chromosomes. RNA sequencing confirmed the increased expression of cytokeratin and mucin genes, and also of TP53 and ERBB2 with some differences among the three cells lines, and revealed a novel exonic mutation in NF1. The PUC-GBC3 clone was the most aggressive according to histopathological features and the tumorigenic capacity in NSG mice. CONCLUSIONS: The first cell lines established from a Chilean GBC patient represent a new model for studying GBC in patients of Native American descent.

Estudo epidemiológico de vítimas de queimaduras internadas em um hospital de urgência da Bahia / Epidemiological study of victims of injured burns in an emergency hospital of Bahia / Estudio epidemiológico de las víctimas de quemaduras ingresado en un hospital de emergencia de Bahia

OBJETIVO: Identificar as características epidemiológicas de pacientes vítimas de queimaduras internados em um Centro de Tratamento de Queimaduras da Bahia. MÉTODO: Estudo epidemiológico retrospectivo, transversal, realizado em um hospital público de referência em queimaduras. Foram incluídos 112 pacientes adultos e idosos de ambos os sexos, por amostragem de conveniência, vítimas de qualquer tipo de queimadura. A amostra foi caracterizada quanto ao sexo, idade, comorbidades, à profundidade, localização, etiologia e extensão da superfície corporal queimada (SCQ). RESULTADOS: A maioria dos pacientes avaliados era do sexo masculino (58,9%, n=66), adultos (91,9%, n=103) e idosos (8,1%, n=9), previamente hígidos (77,7%, n=87) e entre aqueles com comorbidades, 21,4% (n=24) eram hipertensos e 6,3% (n=7) diabéticos. Cerca de 50% (n=53) dos pacientes tinham queimadura em graus diferentes, atingindo até 10% de SCQ. O principal agente etiológico foi queimadura por líquido quente (66%, n=74), com maior prevalência nos membros superiores (70,5%, n=79), seguida da região da cabeça (46,4%, n=52) e membros inferiores (45,5%, n=51). CONCLUSÃO: Houve predomínio de pacientes adultos, do sexo masculino, previamente hígidos, com queimadura de segundo grau, decorrente de algum líquido, acometendo principalmente os membros superiores e atingindo até 10% da SCQ. Programas educacionais contínuos em prol da prevenção são necessários, pois muitos acidentes com queimaduras poderiam ser evitados.

OBJECTIVE: To identify the epidemiological characteristics of patients who are victims of burns hospitalized at a Burn Treatment Center in Bahia. METHODS: Retrospective, cross-sectional epidemiological study conducted at a public hospital burn reference. We included 112 adult and elderly patients of both sexes, by convenience sampling, victims of any type of burn. The sample was characterized by sex, age, comorbidities, depth, location, etiology and extent of burned body surface (BBS). RESULTS: The majority of the patients were male (58.9%, n=66), adults (91.9%, n=103) and elderly (8.1%, n=9), previously healthy (77.7%, n=87) and among those with comorbidities, 21.4% (n=24) were hypertensive and 6.3% (n=7) were diabetic. About 50% (n=53) of the patients had burns in different degrees, reaching up to 10% BBS. The main etiological agent was hot liquid burn (66%, n=74), with a higher prevalence in the upper limbs (70.5%, n=79) followed by the head region (46.4%, n=52) and lower limbs (45.5%, n=51). CONCLUSION: There was a predominance of adult, male patients, previously healthy, with second degree burns, due to some liquid, mainly affecting the upper limbs and reaching up to 10% of SCQ. Continued educational programs for prevention are needed, as many accidents with burns could be avoided.

Objetivo: Identificar las características epidemiológicas de las víctimas de quemaduras ingresados en un Centro de Tratamiento de Quemaduras de Bahía. Método: Estudio epidemiológico transversal, retrospectivo, realizado en un hospital público de referencia para las quemaduras. Se incluyeron 112 pacientes adultos y ancianos de ambos sexos, para la muestra de conveniencia, víctimas de cualquier tipo de quemadura. La muestra se caracterizó cuanto al género, la edad, comorbilidades, la profundidad, la ubicación, la etiología y la extensión de la superficie corporal quemada (SCQ). Resultados: La mayoría de los pacientes eran hombres (58,9%, n=66), adultos (91,9%, n=103) y ancianos (8,1%, n=9), previamente sanos (77,7%, n=87) y entre aquellos con comorbilidades, 21,4% (n=24) eran hipertensos 6,3% (n=7) y diabéticos. Aproximadamente el 50% (n=53) de los pacientes tenían quemaduras en distintos grados, alcanzando el 10% de SCQ. El principal agente etiológico fue quemada por el líquido caliente (66%, n=74), con la más alta prevalencia en las extremidades superiores (70,5%, n=79), seguido por la región de la cabeza (46,4%, n=52) y las extremidades inferiores (45,5%, n=51). Conclusión: Se encontró un predominio de pacientes adultos, varón, previamente sano, con quemadura de segundo grado, derivado de cualquier líquido, que afecta principalmente a las extremidades superiores y hasta el 10% de la SCQ. Se necesitan programas educativos continuos para la prevención, porque muchos accidentes con quemaduras podrían evitarse.

Effects of c-FLIPL knockdown in cervical uterine carcinoma cell lines / Efectos de la inhibición de C-Flipl en líneas celulares de cáncer de cuello uterino

Overexpression of Short and Raji variants of Cellular FLICE-like inhibitory protein (c-FLIP) is capable of inhibiting apoptosis, while the function of the Long isoform depends of c-FLIPL concentration in cells. The aim of this study was to determine the effects of c-FLIPL knockdown in cervical cell lines. SiHa, C-4I and C-33A cervical cancer cell lines were analyzed. c-FLIPL level expression was determined by quantitative real-time PCR and western blotting. c-FLIPL was transiently downregulated by siRNA. The effects of knockdown of c-FLIPL on cell viability, proliferation and apoptosis were assessed by comparing with scrambled siRNA-transfected cells. SiHa and C-4I c-FLIPL knockdown cells showed increased viability compared with scrambled siRNA-transfected cells (P<0.05), while C-33A cells did not show significant differences. Ki-67 and PCNA immunocytochemistry was performed to evaluate proliferation on these cervical cancer cell lines. SiHa cells with c-FLIPL knockdown showed elevated expression of Ki-67 protein compared with their scrambled counterparts (P<0.0001), while C-33A c-FLIPL knockdown cells showed a significantly lower in PCNA expression (P<0.01) compared with control. All three c-FLIP-transfected cell lines showed a higher level of apoptosis compared with their scrambled controls. Our results suggest that c-FLIPL could have effects in proliferation and apoptosis in cervical cancer cell lines.

Cuando las variantes Short y Raji de la proteína Cellular FLICE-like inhibitory protein (c-FLIP) se encuentran sobrexpresadas son capaces de inhibir la apoptosis, mientras la función de la isoforma Long (c-FLIPL), depende de la concentración de esta molécula en las células. El objetivo de este estudio fue determinar los efectos de la inhibición de c-FLIPL en líneas celulares de cáncer de cuello uterino. Para realizar el estudio fueron utilizadas SiHa, C-4I y C-33A, líneas celulares de cáncer cervical. La expresión de c-FLIPL en estas líneas fue establecida mediante PCR en tiempo real y western blot. Posteriormente la expresión de c-FLIPL fue inhibida, mediante transfeción transiente con siRNA complementario al mRNA mensajero de c.-FLIPL. Los efectos de esta inhibición en la viabilidad celular, proliferación y apoptosis fue comparada con células transfectadas con un siRNA control (scrambled). Una vez reprimido c-FLIPL, las líneas celulares SiHa y C-4I presentaron un aumento de la viabilidad celular (P<0,05). Para evaluar la proliferación celular se utilizó inmunocitoquímica de los marcadores Ki-67 y PCNA. Las células SiHa transfectadas con siRNA c-FLIPL, mostraron una elevada expresión de Ki-67 (P<0,0001), mientras que las células C-33A con c-FLIPL inhibido mostraron una menor expresión de PCNA (P<0,01). Las tres líneas celulares con c-FLIPL reprimido mostraron un mayor nivel de apoptosis que las células control. Estos resultados sugieren que c-FLIPL puede tener efectos en la proliferación y apoptosis de líneas celulares de cáncer de cuello uterino.

La translocación in vitro citoplasma/núcleo del factor de transcripción embrionario oct-4 en células perivasculares propone a la aorta como un nicho quiescente de células madres adultas / In vitro translocation cytoplasm/nucleus of embryonic transcription factor oct-4 in perivascular cells suggests that aorta as a niche of quiescent adult stem cells

Las células perivasculares tienen un origen común en las células madre embrionarias y en los vasos sanguíneos que proporcionan un nicho para la mantención de su troncalidad. La expresión de marcadores embrionarios y de células indiferenciadas, como también la gran variedad de fenotipos celulares generados desde los pericitos, podrían ser explicados por la capacidad de estas células de ser inducidas a un estado "stemness" cuando son tratadas con factores adecuados. Nuestros resultados describen la expresión de células con OCT-4 citoplasmático en una ubicación anatómica perivascular donde de su nicho se encuentra en la región intima de la aorta en rata. In vitro las células aisladas por el método de explante que promueve el aislamiento de células migratorias desde los tejidos muestran un fenotipo con un citoplasma alargado y que expresan aSMA, PDGFRa y b, siendo estos dos últimos marcadores específicos de pericitos. En estas células se presenta una tranlocación a la variante nuclear de OCT-4 que ha sido descrito como el principal regulador de los procesos de autorrenovación y pluripotencia. La expresión de OCT-4 confirma y amplía aún más las observaciones obtenidas en nuestras investigaciones anteriores y demuestra que células madre se encuentran en los vasos sanguíneos en un microambiente que, probablemente, les permite que sobrevivan y permanezcan en reposo como un tipo de célula troncal quiescente.

Perivascular cells have a common origin from embryonic stem cells and blood vessels provide a niche for the maintenance of their stemness. Embryonic markers expression of undifferentiated cells, as well as, the wide variety of cellular phenotypes generated from pericytes, could be explained by the ability of these cells to be induced to a state of "stemness" when treated with appropriate factors. Our findings describe the expression of cells with cytoplasmic OCT-4 in perivascular anatomical location where their niche region is in the intima of the aorta in rats. In vitro isolated cells by explant method that promotes the isolation of migratory cells from tissues show an elongated cytoplasm phenotype, expressing aSMA, PDGFRa & b where the last two are specific markers of pericytes. These cells present a translocated nuclear variant of OCT-4 that has been described as the master regulator of self-renewal processes and pluripotency. The expression of OCT-4 further confirms and extends the observations obtained in our previous research and proves that stem cells found in the blood vessels in a microenvironment that probably allows them to survive and remain at rest as a type of quiescent stem cell.

Los pericitos: nuevos enfoques en la terapia regenerativa, patología cerebrovascular y cáncer / Pericytes: new approaches in regenerative therapy, cerebrovascular pathology and cancer

Las células madre mesenquimales son poblaciones multipotentes de células que tienen amplia capacidad de diferenciación, plasticidad y potencial inmunosupresor, lo que las hace una herramienta de gran importancia en las terapias basadas en células.En función de su potencial, se ha determinado que las células perivasculares poseen características de células madre de gran potencial clínico, no obstante, las propiedades biológicas que llevan a su diferenciación son menos comprendidas. Los últimos avances en la comprensión de la relación entre pericitos y las células madre mesenquimales plantean funciones específicas de tejido, así como, su potencial uso terapéutico en las isquemia, tales como, la cerebro-vascular y un mejor entendimiento de la vascularización patológica tumoral. A pesar de la creciente aceptación que las células perivasculares están relacionada o son células madre mesenquimales, existen escasas pruebas experimentales que muestren la diferenciación de pericitos en diferentes tipos de células (Feng et al., 2010). En esta revisión documentamos los fundamentos biológicos de los pericitos que respaldan su uso en terapia regenerativa.

Mesenchymal stem cells are a multipotent population of cells that have extensive capacity for differentiation, plasticity and immunosuppressive potential, making them an important tool in cell-based therapies. According to their potential, it has been determined that perivascular cells have stem cell characteristics of great clinical potential, however, the biological properties that lead to their differentiation are less understood. Recent advances in understanding the relationship between pericytes and mesenchymal stem cells pose tissue-specific functions, as well as their potential therapeutic use in ischemia, such as cerebro-vascular and a better understanding of the pathological tumor vascularization. Despite the growing acceptance that perivascular cells are related, or that they are mesenchymal stem cells, there is little experimental evidence to show the differentiation of pericytes in different cell types (Feng et al., 2010). In this review we document the biological basis of pericytes that support their use in regenerative therapy.